Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐适配

从第一次显现胰脏自身特异性到显现1标准型白血病药理学副作用的实质性率在幼儿时期就有良好的叙述，多个胰脏自身特异性白血病的幼儿中都有70%在肝细胞反转后10年底患上白血病，而随访15年的幼儿这一数目增高到84%。远比之下，占去药理学1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的发病选择性还没得到合理的学术研究。

愈加多的人开始用于再行系统来判别1标准型白血病的实质性：个形体在显现多种胰脏自身特异性时转入第1之前，显现血糖反常时转入第2之前，显现副作用时转入第3之前。一些多发胰脏自身特异性白血病的个形体，在1期和2期，实质性较迟，并发展为发病的1标准型白血病。我们之前叙述了一第三组在首次测定到多种胰脏自身特异性样本后非常再加10年无白血病的想像中都迟实质性者，这第三组患儿多人再加，但特征非常恰当。随后，我们发现胰脏自身特异性选择性CD8+T细胞膜化学反应在实质性减迟的患儿中都整形体不存有，但在近期发病和长期存有的白血病患儿中都很易于测定到。这或许得出新论证，与实质性患儿远比，这些患儿自身免疫化学反应的平衡强化。

早期学术研究得出新论证，尽管平衡性T细胞膜(Treg)数量正常，但白血病患儿存有一些基本功能缺点，其中都还包括对IL-2的化学反应能力减缓。此外，白血病患儿中都的振荡CD4+T细胞膜或许对平衡想像中都富抵抗性，表现为振荡T细胞膜的选择性逼近，自然现象归因于的Treg和胃归因于的游离Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞膜中都IL-2化学反应逼近。本学术研究的旨在是叙述了CD4+平衡性T细胞膜(Treg)在一小群想像中都减迟实质性者中都的特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁不限确诊的患儿直系亲属中都检查1标准型白血病的危险性主因。我们之前叙述了长期减迟实质性者的特征，他们保持一致多重胰脏自身特异性白血病超过10年，但没显现白血病的药理学副作用，迟性或非短暂性自身免疫。随后，10名在此之后保持一致无白血病并想提供大量肝细胞样本的减迟实质性者引入到T和B细胞膜基本功能分析。在目前的学术研究中都，8名迟实质性者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身特异性白血病。所有的参加者都西北面1标准型白血病实质性的1期，尽管一些人随后得不到了胰脏自身特异性对某些特异性的白血病化学反应，然而，一名患儿已经西北面2期非常再加6年，但没显现药理学副作用，一名患儿被诊断为白血病，该人脑72岁，在搜集物理样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在分析中都对该遗传物质展开了直接评核。分离外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，换用多参数流式细胞膜绝技和T细胞膜选择性试验评核遗传物质中都Treg的增益、表标准型和基本功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和紧接)展开无监督聚类分析，评核Treg表标准型。

结果：与生活品质遗传物质远比，来自迟实质性形体的遗忘CD4+T细胞膜的监督聚类看出新，这样的话的遗忘CD4+ Treg增益增高，与低剂量游离的TNFR相关复合物(GITR)对此增高有关。一名HbA1c急剧下降的患儿与实质性减迟者和最简单的对照第三组远比，Treg谱大同小异。基本功能分析得出新论证，与生活品质遗传物质远比，来自减迟实质性形体的Treg介导的CD4+振荡T细胞膜选择性明显受损。表现为对振荡CD4+T细胞膜CD25和CD134对此的选择性增高。

平面图1 深入的表标准型分析看出新，CD4+Treg亚标准型在迟实质性函数调用中都增高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上标物对此断定出新10个元簇:遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用于9个不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个节点都是一个战斗群(100个战斗群)，来得大的元战斗群(10个元战斗群)在节点第三组四周上色。每个节点中都的饼平面图对此单个上标的对此层级。(b)每个元聚类的热平面图，以看出新整形体上标对此。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)分解成平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较为丰度为每个metacluster盒1](丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞膜(l)。紫色左上角都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg增益的增高是实质性减迟的标志。级别除此以外(a - f)和葡萄分析(g-k)较为SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的都是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR对此展开分离，演示FlowSOM群形体。(b) HD(横纹)和SP(蓝点)第三组以及遗传物质SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的增益摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外同构的盒1];(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)棉花簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此强度纹理，箭头突出新的簇被辨认为SP和HD函数调用二者之间的不同。(j)盒1]看出新了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较为丰度(数目)。(k)平方和看出新每个簇的表标准型(白色)和Treg上标相较为对此与背景对此(白色);上列，存储器Treg_3;请注意恰巧，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中都上标的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

平面图3 与生活品质献血者远比，实质性减迟者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T细胞膜元簇(遗忘T细胞膜_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞膜;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个对此上标的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的对此热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中都所有HD(白色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR对此结合，看出新平方和(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(紫色)所有遗传物质还包括，p< 0.05(白色)遗传物质SP 606和最简单的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR对此，从级别除此以外，从所有HD(白色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)结合，看出新平方和(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

平面图4 来自减迟实质性的CD4+ treg细胞膜控制振荡CD4+T细胞膜的能力减缓。SP第三组用白色的直通和左上角对此，HD第三组用黄色的直通和左上角对此，紫色的直通/左上角对此遗传物质sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按注意到的数目试样。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培养3同月展开流式细胞膜绝技测定。(a-d)与CD4+这样的话者相较为应的treg培养(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百份。用于白血病对照(这样的话的组织起来细胞膜下同treg)计算选择性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

平面图5 振荡CD4+T细胞膜对减迟实质性的T细胞膜转化的选择性来得引人注目。SP第三组用白色的直通和左上角对此，HD第三组用黄色的直通和左上角对此，紫色的直通/左上角对此遗传物质sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按注意到的数目试样。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培养3同月展开流式细胞膜绝技(CD25反染)和细胞膜因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性三份(b)。(c,d) CD25选择性三份(c)和CD134选择性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中都的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论证：我们得出新的论证是，来自减迟实质性子的转化遗忘CD4+Treg在GITR对此中都得到了引入和丰富多彩，重申了实质性学术研究Treg在1标准型白血病风险个形体中都的系统性的实质。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28